下图表示我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”主要培育流程,据图回答:
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(1)①过程需要的工具酶是__________,④过程应用的生物技术主要是_________。
(2)杀虫基因(crylA)是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构没计并人工合成的,这属于_________工程技术。
(3)若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的末端为,则该酶识别的核苷酸序列是__________。
(4)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。上图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(部分基因及部分限制性核酸内切酶作用位点),据图分析:
①.人工改造时,要使抗虫基因表达,还应插入___________。
②.人工改造时用限制酶Ⅱ处理,其目的是:第一,去除质粒上的__________(基因),保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;第二,使质粒带有单一限制酶作用位点,有利于__________;第三,使质粒大小合适,可以提高转化效率等。
③.若用限制酶1分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子,并构成重组Ti质粒,分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞,观察到的细胞生长的现象是_______。
(5)检测“华恢1号”抗虫性状的方法是____________。
(1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 植物组织培养
(2)蛋白质
(3)GACGTC
(4)①.启动子 ②.tms和tmr 目的基因(或外源DNA)准确插入 ③.在含卡那霉素的培养基中能够生长,而在含四环素的培养基中不能生长
(5)害虫抗性接种实验法(或相关描述)